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（一）淋球菌检查1方法(1)标本采集:用含无菌生理盐水的藻酸钙棉拭子,伸入男性尿道2~4cm,轻轻转动取出分泌物;女性先用无菌的脱脂棉擦去阴道内黏液,用无菌藻酸钙脱脂棉拭子插宫颈内1~2cm处旋转取出分泌物;患结膜炎的新生儿取结膜分泌物;全身性淋病时可取关节穿刺液;前列腺炎患者经按摩后取前列腺液。(2)直接涂片:主要用于急性感染患者。涂片2张，自然干燥、加热固定后作革兰染色,油镜下检查。(3)细菌培养:标本立即接种于血琼脂或巧克力琼脂平板上,置于含5%~10%的CO?孵箱,37°C孵育24~48小时后观察结果。挑选可疑菌落作涂片染色镜检,也可用氧化酶试验或糖发酵试验进一步证实。2结果涂片染色镜检可见大量多形核细胞,细胞内外可找到成双排列，呈肾形的革兰阴性双球菌(图6-7)。在培养皿上可形成圆形、稍凸、湿润、光滑、透明到灰白色的菌落,直径为0.5~1mm。生化反应符合淋球菌特性。3临床意义直接涂片镜检阳性者可初步诊断,但阴性不能排除诊断;培养阳性可确诊。4注意事项①取材时拭子伸入尿道或宫颈口内的深度要足够;②男性患者最好在清晨首次排尿前或排尿后数小时采集标本进行培养;③涂片时动作宜轻柔,防止细胞破裂变形,涂片厚度，固定及革兰染色时间要合适。（二）衣原体检查1细胞培养法将每份标本接种于3个培养瓶(为MeCoy单层细胞管)中,置37°C吸附2小时后,用维持液洗涤2-3次,最后加生长液,37°C培养3~4天,经吉姆萨染色或直接荧光染色后镜检。阳性标本碘染色包涵体呈棕黑色,吉姆萨染色呈红色。有尿道炎症状,再加上衣原体分离培养阳性者可确诊。2衣原体抗原检测法(clearviewchlamydia,简称C-C快速法)用商品试剂盒检测,方便、简单、快速,但稳定性略差。按说明书操作,质控窗和结果窗均显示一条蓝带为阳性结果,阴性为结果窗无变化。阳性结果结合临床可确定沙眼衣原体感染，阴性时不能完全排除，可用细胞培养法确定。3免疫荧光法采集标本同淋球菌检查。将标本涂于玻片凹孔或圆圈中,干燥处理后加荧光素标记的抗沙眼衣原体单克隆抗体,反应、封固后置荧光显微镜下检查。阳性标本在高倍镜下可见上皮细胞内的原体颗粒,为单一针尖大小、明亮的绿色荧光,在油镜下为荧光均匀、边缘光滑的圆盘样结构,也可见网状体等其他形态的衣原体颗粒。（三）支原体检查采集标本同淋球菌检查,也可用10ml中段尿离心(r/min,10min),取沉渣接种于液体培养基。置5%~10%CO?环境中,37°C培养24~72小时,每天观察颜色变化。如由黄色变为粉红色,可能有解脲支原体生长。取0.2ml培养物接种到固体培养基上,培养48小时后观察,有典型“油煎蛋"状菌落者为阳性,可诊断支原体感染。（四）梅毒螺旋体检查1梅毒螺旋体直接检查可取病灶组织渗出物、淋巴结穿刺液或组织研磨液,用暗视野显微镜检查,也可经镀银染色、吉姆萨染色或墨汁染色后用普通光学显微镜检查，或用直接免疫荧光检查。梅毒螺旋体菌体细长,两端尖直,在暗视野显微镜下折光性强,沿纵轴旋转伴轻度前后运动(图6-8)。镀银染色法示螺旋体呈棕黑色,吉姆萨染色法示螺旋体呈桃红色,直接免疫荧光检查螺旋体呈绿色荧光。镜检阳性结合临床表现、性接触史可确诊。2快速血浆反应环状卡片实验(rapidplasmnareagintest,RPR)(1)原理:为非梅毒螺旋体抗原血清试验。人体感染梅毒螺旋体一定时间后,血清中产生一定数量的心磷脂抗体,可用免疫学方法检测,作为梅毒的诊断筛选试验。(2)操作方法:①卡片定性试验:取50μl待检血清加入卡片的圆圈内并涂匀,用专用滴管加入摇匀的抗原1滴,将卡片旋转8分钟后立即观察结果,出现黑色凝聚颗粒和絮片为阳性;②卡片定量试验:用等量盐水在小试管内作6个稀释度,即1:1、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32,每个稀释度取50μl血清加入卡片圆圈中,按定性法测定。类似方法还有性病研究实验室试验(venerealdiseaseresearchlaboratorytest,VDRL)、不加热血清反应素试验(unheatedserumreagintest,USR)、甲苯胺红不需加热血清试验(toluidineredun-heatedserumtest,TRUST)等。(3)临床意义:本试验敏感性高而特异性低。结果为阳性时，临床表现符合梅毒,可初步诊断。定量试验是观察疗效、判断复发及再感染的手段。假阴性常见于一期梅毒硬下疳出现后的2~3周内、感染梅毒立即治疗、晚期梅毒或二期梅毒的前带现象(prezonephenomenon,详见下)。假阳性常见于自身免疫性疾病、麻风、海洛因成瘾者、少数孕妇及老人。3梅毒螺旋体颗粒凝集试验(treponemapllidumparticleagutiationtest,TPPA)(1)原理:为梅毒螺旋体抗原血清试验。将从感染家兔睾丸中提取的梅毒螺旋体纯化,并以超声粉碎后作为抗原，以明胶颗粒为载体,此致敏颗粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合,产生肉眼可观察的凝集反应。(2)临床意义:阳性结果可明确诊断。类似方法有梅毒螺旋体血凝试验(treponema.pallidumparticlehemagglutinationassay,TPHA)、荧光螺旋体抗体吸收试验(fluorescenttreponemalantibody-absorptiontest,FTA-ABS)。前带现象:在血清学试验中,抗原与抗体呈适当比例时,可出现可见的结合反应。若抗体过多,则抗原抗体的结合不能形成大的复合物,抑制可见的反应出现,可出现于梅毒血清学试验，导致假阴性出现,将抗体作适当稀释则可有效避免。（五）杜克雷嗜血杆菌检查1直接涂片在开放溃疡中不易查到细菌,所以最好从淋巴结潜行穿刺取材,一次推涂成片,以保持细菌的特征性排列方式。如见到呈鱼群状排列的细菌,即可作出初步诊断,但容易出现假阴性或假阳性,特异性和敏感性可能都低于50%。2细菌培养用含血清和低浓度万古霉素的选择培养基培养,24~48小时后观察,菌落直径1~2mm,色灰黄、凸起、粗糙并能在培养基上推动,取菌落镜检或做生化反应可确诊。3其他方法基因扩增技术和单克隆抗体免疫荧光技术的特异性和敏感性均较高。（六）醋酸白试验人类乳头瘤病毒感染的上皮细胞与正常细胞产生的角蛋白不同,能被冰醋酸致白。以棉签清除皮损表面分泌物后,外用5%冰醋酸2-5分钟后观察,皮损变为白色，周围正常组织不变色为阳性。（七）毛滴虫检查在阴道后穹隆、子宫颈或阴道壁上取分泌物混于温生理盐水中，立即在低倍镜下镜检,如有滴虫时可见其呈波状移动。男性可取尿道分泌物、前列腺液或尿沉渣检查。

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